MicroRNA前體表達(dá)克隆真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄形成的非編碼單鏈小分子RNA。它們的序列高度保守,通常是21到23個核苷酸長度,幾乎與所有的細(xì)胞功能和基因表達(dá)調(diào)控有關(guān)。它們通過靶定到mRNA3'非翻譯區(qū)(3'UTR)來調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。MicroRNA靶標(biāo)基因的表達(dá)失調(diào)與癌癥、心血管疾病等各種疾病的發(fā)生有關(guān)。 它是一類由內(nèi)源基因編碼的長度約為22個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子,它們在動植物中參與轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控。microRNA的表達(dá)、抑制或過表達(dá)對于研究基因功能有重要的意義。重組腺病毒是進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移和表達(dá)的工具,功能強(qiáng)大且易于操作。腺病毒*的生物學(xué)特征使它成為“載體的shou選”,被科研工作者廣泛應(yīng)用。
MicroRNA前體表達(dá)克隆有以下幾點(diǎn)性能優(yōu)勢:
1、覆蓋面廣
涵蓋了miRBase最新數(shù)據(jù)庫中幾乎所有已知人、小鼠和大鼠miRNA;
2、靈活的載體選擇
慢病毒載體可轉(zhuǎn)導(dǎo)普通細(xì)胞和難轉(zhuǎn)染、未分化細(xì)胞;
非病毒載體可進(jìn)行穩(wěn)定或瞬時轉(zhuǎn)染;
3、優(yōu)化的表達(dá)框
miRNA表達(dá)框已*測序確證并經(jīng)過優(yōu)化,有利于前體miRNA在細(xì)胞中的表達(dá)和成熟;
4、可選標(biāo)記和報告基因
載體中包含的eGFP標(biāo)簽可以監(jiān)測轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)效率;
新霉素和嘌呤霉素標(biāo)記可用于穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選。