快速蛋白質(zhì)染色劑為一種單組分染色劑,可直接對凝膠上分離的蛋白進(jìn)行染色,用于SDS--PAGE凝膠、非變形PAGE凝膠,或argose膠的快速染色,在清晰背景上產(chǎn)生靈敏度0.5ng以上蛋白質(zhì)的藍(lán)色條帶的經(jīng)典的技術(shù)方法。本方法不需要甲醇、乙醇的固定和脫色。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,操作便捷,敏感度高,顯色清晰,重復(fù)性好得到非常廣泛的使用。
快速蛋白質(zhì)染色劑的操作方式:
1.洗滌PAGE電泳膠:去離子水洗滌3次,每次約5min。
電泳結(jié)束后,取膠放入約200ml去離子水中,在側(cè)擺或水平搖床上搖動5分鐘,棄液體,再重復(fù)兩次,共洗滌三次。
注意:本洗滌步驟的目的是為了洗去凝膠中的SDS等干擾物質(zhì)。如果不能充分去除SDS會導(dǎo)致背景較高。
2.染色:加入約30-50ml快速蛋白質(zhì)染色劑,染色1小時(shí)。
棄去離子水,加入適量的快速蛋白質(zhì)染色劑(每塊大小約8×8厘米的凝膠需使用約30-50ml),使染色液能覆蓋凝膠,且液面至少高出三個(gè)膠的厚度為宜,室溫下在側(cè)擺或水平搖床上進(jìn)行染色,直至蛋白條帶變清晰。
注意:推薦的室溫(20-25℃)染色時(shí)間為1小時(shí),實(shí)際染色時(shí)間可以根據(jù)染色效果自行調(diào)整,染色至能看到清晰的目標(biāo)蛋白條帶后,棄染色液,加入適量的去離子水,停止染色反應(yīng),然后即可拍照記錄。延長染色時(shí)間,不會增加背景顏色。
3.脫色:去離子水至少脫色30分鐘(或者過夜)),脫色的PAGE膠可于去離子水中保存。
如果希望獲得更加清晰的蛋白條帶,可以加入約200ml去離子水室溫洗滌約30分鐘甚至過夜。通過去離子水洗滌可以進(jìn)一步降低背景,獲得更好的染色效果。