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游離DNA提取試劑盒的操作步驟

發(fā)布日期: 2018-04-20
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游離DNA提取試劑盒專為從血清或是血漿中提取游離循環(huán)DNA而設(shè)計,該試劑盒根據(jù)樣品量分為200μl樣品的小提試劑盒以及適用樣品量為1ml,2ml,2.5ml,5ml大提試劑盒。所用樣品為新鮮血漿或是血清樣品,-80℃的凍存樣品也適用但不能反復(fù)凍融。試劑盒可有效結(jié)合血漿及血清中濃度低至50pg/ml的游離DNA片段,由于該試劑盒zui后洗脫體積可低至20μl,這一特性使試劑盒具有濃縮提取低濃度游離DNA片段的作用。提取得到DNA片段既可直接用PCR擴(kuò)增,qPCR測定,二代測序(NGS)等下游分子操作,也可置于-20℃儲存?zhèn)溆谩S坞xDNA提取試劑盒的操作步驟 
1. 請自行準(zhǔn)備:無水乙醇、1.5mL離心管。 
2. 取出洗滌液,按以下操作: 
a) 洗滌液A:21mL加入9mL無水乙醇;42mL加入18mL無水乙醇。 b) 洗滌液B:9mL加入21mL無水乙醇;18mL加入42mL無水乙醇。 c) 配制好的洗滌液如出現(xiàn)沉淀,可在37℃溶解,搖勻后使用。 
3. 取1.5mL離心管,加入200μL樣本,4μLDNA Carrier混合均勻,加入300μL 裂解液及20μL 消化液,振蕩混勻,56℃水浴10 分鐘。
4. 加入1000μL無水乙醇,輕輕顛倒混勻,如有半透明懸浮物,不影響DNA的提取與后續(xù)實驗。 
5. 將吸附柱放入收集管內(nèi),將760μL上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi),靜置2 分鐘,12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,棄收集管內(nèi)廢液;
6. 將吸附柱放回收集管內(nèi),將剩余760μL溶液轉(zhuǎn)移至吸附柱內(nèi),重復(fù)步驟5。 
7. 將吸附柱放回收集管內(nèi),加500μL 洗滌液A至吸附柱內(nèi),12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,棄收集管內(nèi)廢液。
8. 將吸附柱放回收集管內(nèi),加500μL 洗滌液B至吸附柱內(nèi),12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,棄收集管內(nèi)廢液。
9. 將吸附柱放回收集管內(nèi),12,000 rpm 4℃離心2 分鐘,離去殘留的洗滌液。 
10. 取出吸附柱,放入新的1.5 mL 離心管內(nèi),加入30-50 μL 洗脫液,靜置3 分鐘,12,000 rpm 4℃ 離心2 分鐘,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步實驗或-20℃保存。