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微量細(xì)胞核酸的提取方法多樣

發(fā)布日期: 2021-12-28
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   微量細(xì)胞核酸提取方法種類很多,如酚、氯仿等有機(jī)溶劑抽提法、硅膠膜吸附柱法等。但由于操作過程中使用到各種有機(jī)溶劑會危害人體健康,操作步驟繁瑣復(fù)雜,單位時間通量低不易實(shí)現(xiàn)自動化,提取出的核酸濃度純度較低等因素為傳統(tǒng)核酸提取技術(shù)的瓶頸。
  
  微量細(xì)胞核酸目前對于臨床珍貴的組織樣本、穿刺樣本或法醫(yī)取證的少量樣本dna、rna共提取的方法依然是將細(xì)胞裂解液分成兩部分,一部分用trizol法(即硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法)提取rna,一部分用酚-氯仿-異丙醇-乙酸氨法抽提或者是膜吸附柱的方法提取dna和rna。無論是trizol法還是膜吸附柱法提取核酸,都是基于組織樣本或者是穿刺樣本,細(xì)胞數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過100個。而對于臨床微量細(xì)胞樣本,當(dāng)細(xì)胞數(shù)量只有5-20個,或細(xì)胞數(shù)量小于50個時,現(xiàn)有的技術(shù)方案并不適用于同時提取超微量細(xì)胞中的dna和rna。
  
  臨床及生物醫(yī)學(xué)研究中常常需要從各種生物組織或細(xì)胞中抽提基因組dna或mrna,應(yīng)用核酸擴(kuò)增技術(shù)測定其成分,這是用于病癥的輔助性分析和診斷的一種高度敏感,且最為直接的檢測手段。所以核酸提取是生物醫(yī)學(xué)研究和臨床上進(jìn)行基因表達(dá)水平檢測、基因克隆或測序等工作之前,樣品處理的必要步驟。
  
  生物樣品,如培養(yǎng)的細(xì)胞、動植物組織、體液(如血液、分泌物、棉拭子、膿液、痰液、組織液等)、微生物樣品等都需要經(jīng)過適當(dāng)?shù)奶幚?,將其中的核酸提取出來進(jìn)行下一步的分析,如基因表達(dá)水平檢測、基因克隆或測序等。目前常用的核酸提取試劑中都采用胍鹽、表面活性劑、酚、氯仿等作為樣品裂解、核酸純化試劑;常用的操作方法有手工法、吸附柱法和磁珠法等。