1）       總RNA提取

       2）       已知序列的驗(yàn)證：根據(jù)客戶提供的已知序列設(shè)計(jì)引物，以總RNA為模板進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，驗(yàn)證參考序列的存在及方向。

       3）       5’和3’RACE

               a）       RNA的去磷酸化處理

               b）       RNA的3’末端處理；RNA的5’末端處理

               c）       cDNA的合成

               d）       5’和3’RACE的PCR反應(yīng)

               e）       PCR產(chǎn)物構(gòu)建TA克隆

               f）       分別隨機(jī)挑取10個(gè)克隆進(jìn)行測(cè)序

       4）       對(duì)獲取的序列進(jìn)行驗(yàn)證以驗(yàn)證獲取的5' RACE或3' RACE序列與已知序列是否連續(xù)存在于同一條cDNA片段上。

客戶提供

         總RNA量大于10 mg，如果基因的豐度較低或者未知序列較長(zhǎng)，請(qǐng)?zhí)峁┍M量多的實(shí)驗(yàn)材料。

         已知的參考序列長(zhǎng)度≥200 bp。

我們提供

         構(gòu)建好5’和3’RACE的TA克隆（含20%甘油的LB培養(yǎng)基）,裝到PMD18-T載體上；測(cè)序圖譜；實(shí)驗(yàn)報(bào)告

質(zhì)量保證

         獲取的5' RACE或3' RACE序列與已知序列連續(xù)存在于同一條cDNA片段上